怎样做生物需氧量BOD实验

生化需氧量(BOD5)的测定 
（五日培养法）

一．实验目的 
1．了解生化需氧量（BOD5）的含义。 
2．掌握五日培养法测定生化需氧量的基本原理。 
3．熟练掌握碘量法测定DO的操作技术。 
4．明确化学需氧量和生化需氧量的相关性。 
二．实验原理 
五日培养法也称标准稀释法或稀释接种法。其测定原理是：水样经稀释后，在20℃±1℃条件下培养5天，求出培养前后水样中溶解氧含量，二者的差值为BOD5。 
如果水样五日生化需氧量未超过7 mg/L，则不必进行稀释，可直接测定。很多较清洁的河水就属于这一类水。溶解氧测定方法一般用碘量法。 
三．实验仪器、设备 
1．20℃±1℃恒温培养箱。 
2．5～20L细口玻璃瓶。 
3．250mL溶解氧瓶：带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口。 
4．1000mL量筒。 
5．玻璃搅拌棒：棒长应比所用量筒高度长20cm，棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并有几个小孔的硬橡胶板。 
6．虹吸管：供分取水样和添加稀释水用。 
四．实验试剂 
1．磷酸盐缓冲溶液：将0.85g磷酸二氢钾（KH2PO4）、2.175g磷酸氢二钾（K2HPO4）、3.34g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和0.17g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至100mL。此溶液的pH应为7.2。 
2．硫酸镁溶液：将2.25g硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至100mL。 
3．氯化钙溶液：将2.75g无水氯化钙溶于水中，稀释至100mL。 
4．氯化铁溶液：将0.025g氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水中，稀释至100mL。 
5．盐酸溶液（0.5mol/L）：将4mL（ρ=1.18g/mL）盐酸溶于水，稀释至100mL。 
6．氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：将2g氢氧化钠溶于水，稀释至100mL。 
7．亚硫酸钠溶液（c 1/2Na2SO3=0.025mol/L）：将0.1575g亚硫酸钠溶于水，稀释至100mL。此溶液不稳定，需当天配制。 
8．葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸（HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH）在103℃干燥1h后，各称取15mg溶于水中，移入100mL容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。此标准溶液临用前配制。 
9．稀释水：在5～20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。然后用无油空气压缩机或薄膜泵将此水曝气2～8h，使水中的溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量达8 mg/L左右。临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。稀释水pH应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L。 
10．接种液：可选用以下任一方法获得适用的接种液。 
① 城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。 
② 表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清溶液供用。 
③ 用含城市污水的河水或湖水、污水处理厂的出水。 
④ 当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3～8km处取水样作为废水的驯化接种液。如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。一般驯化过程需要3～8天。 
11．接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。每升稀释水中接种液加入量为：生活污水1～10mL；表层土壤浸出液20～30mL；河水或湖水10～100mL。接种稀释水pH应为7.2，其BOD5在0.3～1.0mg/L之间为宜。接种稀释水配制后应立即使用。 
五．实验步骤 
1．水样的预处理： 
① 水样的pH值若超出6.5～7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调pH值近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。 
② 水样中含有铜、锌、铅、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数，降低毒物的浓度。 
③ 含有少量游离氯的水样，一般放置1～2h，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。其加入量的计算方法是：取中和好的水样100 mL，加入1+1乙酸10 mL，10%（m/V）碘化钾溶液1 mL，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需亚硫酸钠溶液的量。 
④ 从水温较低的水域或富营养化的湖泊采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。 从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。 
2．水样的测定： 
① 不经稀释水样的测定：对于溶解氧含量较高、有机物含量较少的清洁地表水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样后溢出少许，加塞水封（瓶内不应有气泡）。立即测定其中一瓶溶解氧，将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养5d后，测其溶解氧。 
② 需经稀释水样的测定：对于污染的地表水和大多数工业废水，需要稀释后再培养测定。根据实践经验，稀释倍数（指稀释后体积与原水样体积之比）用下述方法计算。 

地表水由测得的高锰酸盐指数（CODMn）乘以适当的系数求得（见下表）
 
高锰酸盐指数（CODMn）/（mg·L-1）              系数 

＜5                                            — 
  5～10                                         0.2、0.3
  10～20                                         0.4、0.6
    ＞20                                        0.5、0.7、1.0
  

工业废水可由重铬酸钾法测得的CODcr值确定。通常需作三个稀释比，使用稀释水时，由CODcr值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则CODcr值分别乘以系数0.075、0.15、0.25，获得三个稀释倍数。 
稀释倍数确定后，按下法之一测定水样。 
a．一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。 
按不经稀释水样的测定步骤，进行装瓶，测定当天溶解氧和培养5天后的溶解氧含量。另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白，分别测定5天前、后的溶解氧含量。 
ｂ．直接稀释法：在溶解氧瓶内直接稀释。在已知两个容积相同（其差小于1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水（或接种稀释水）至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。其余操作与上述一般稀释法相同。 
在BOD5测定中，一般采用碘量法测定溶解氧。如遇干扰物质，应根据具体情况采用其他测定法。溶解氧的测定方法附后。 
3．BOD5计算： 
① 不经稀释直接培养的水样： 
BOD5（mg/L）=C1－C2
式中：C1——水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L； 
C2——水样经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L。 
② 经稀释后培养的水样：

BOD5（mg/L）=

式中：
C1——稀释后的水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L； 
C2——稀释后的水样经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L； 
B1——稀释水(或接种稀释水)在培养前的溶解氧浓度，mg/L； 
B2——稀释水(或接种稀释水)经5天培养后，剩余的溶解氧浓度，mg/L； 
f1——稀释水(或接种稀释水)在培养液中所占比例；
f2——原水样在培养液中所占比例。 
六．实验报告要求 
1．写出实验名称、实验方法、采样时间和地点。 
2．写出实验目的、实验原理、实验仪器设备、实验试剂、实验步骤。 
3．认真做好课后思考题。 
七．注意事项 
1．水中有机物的生物氧化过程分为碳化阶段和硝化阶段，测定一般水样的BOD5时，硝化阶段不明显或根本不发生，但对于生物处理池的出水，因其中含有大量硝化细菌，因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙烯基硫脲（ATU、C4H8N2S）等。 
2．在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2 mg/L和剩余溶解氧大于1 mg/L都有效，计算结果时，应取平均值。 
3．为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作技术，可将20mL葡萄糖-谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000 mL，按测定BOD5的步骤操作，测其BOD5，其结果应在180～230 mg/L之间。否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。 
附：碘量法测定水中溶解氧（DO） 
一．实验原理 
在水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾溶液，水中的溶解氧将二价锰氧化成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。加酸后，沉淀溶解，四价锰又可氧化碘离子而释放出与溶解氧量相当的游离碘。以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘，可计算出溶解氧含量。反应式如下： 
MnSO4+2NaOH=Na2SO4+Mn(OH)2↓ 
2Mn(OH)2 +O2=2 MnO(OH)2↓（棕色沉淀） 
MnO(OH)2+2H2SO4=Mn(SO4)2+3H2O
Mn(SO4)2+2KI= MnSO4+K2SO4+I2
2Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI
二．实验仪器、设备 
1．250mL溶解氧瓶。 
2．250mL锥形瓶。 
3．25mL酸式滴定管。 
4．1mL、2mL吸管。 
5．50mL移液管。 
三．实验试剂 
1．硫酸锰溶液：称取36.4g硫酸锰(MnSO4·H2O )或48g（MnSO4·4H2O）溶于水中，稀释至100mL。此溶液加至酸化过的碘化钾溶液中，遇淀粉不得产生蓝色。 
2．碱性碘化钾溶液：称取50g氢氧化钠，溶解于30～40mL水中，另称取15g 碘化钾溶于20mL水中，待氢氧化钠溶液冷却后，将两溶液混合，加水稀释至100mL。如有沉淀则放置过夜，倾出上清液，贮于棕色瓶中，用橡胶塞塞紧，避光保存。此溶液酸化后，遇淀粉应不呈蓝色。 
3．（1+5）硫酸溶液（标定硫代硫酸钠溶液用）。 
4．1%（m/V）淀粉溶液：称取1g可溶性淀粉，用少量水调成糊状，再用刚煮沸的水稀释至100mL。冷却后，加入0.1g水杨酸或0.4g氯化锌防腐。 
5．重铬酸钾标准溶液（c 1/6 K2Cr2O7=0.025mol/L）：称取在105～110℃烘干2h，并冷却的优级纯重铬酸钾1.2258g溶于水中，移入1000mL容量瓶内，稀释至标线，摇匀。 
6．硫代硫酸钠溶液[c Na2S2O3·5H2O≈0.0125 mol/L]：称取3.1g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL，贮于棕色瓶中。使用前，用0.025mol/L重铬酸钾标准溶液标定。 
标定方法：于250mL碘量瓶中，加入100mL水和1g 碘化钾，加入10.00 mL0.025mol/L重铬酸钾标准溶液，5mL（1+5）硫酸溶液，密塞，摇匀。于暗处静置5min后，用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录用量。


 式中：C——硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L； 
V——滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL。 
7．浓硫酸：ρ=1.84。 
四．实验步骤 
1．溶解氧的固定：用吸管插入溶解氧瓶的液面下加入1mL硫酸锰溶液、2mL碱性碘化钾溶液，盖好瓶塞，颠倒混合数次，静置。待棕色沉淀物降至瓶内一半时，再颠倒混合一次，待沉淀物下降到瓶底（一般在取样现场固定）。 
2．溶解：打开瓶塞，立即用吸管插入液面下加入2.0mL浓硫酸。小心盖好瓶塞，颠倒混合摇匀，至沉淀物全部溶解，放于暗处静置5min。 
3．滴定：吸取100.00 mL上述溶液于250mL锥形瓶中，用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去，记录硫代硫酸钠溶液用量。用下式计算水样中溶解氧浓度： 

溶解氧（O2，mg/L）=

式中：
C——硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L； 
V——滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL。 
五．注意事项 
1．水样中含有亚硝酸盐会干扰碘量法测定溶解氧，可采用叠氮化钠修正法（除了将碱性碘化钾改为碱性碘化钾-叠氮化钠以外，其他与普通碘量法相同）。此法适用于多数污水及生化处理出水。 
2．当水样中三价铁离子含量较高时，干扰测定，可加入氟化钾或用磷酸代替硫酸酸化来消除。

BOD5测试注意事项
1. 必须要根据水样做一些估计,方能正确测量
做BOD5之前*好先做CODCr，看看他的COD值是多少。再根据这个估计BOD5，再稀释估计需要的倍数。一般比较脏的水的COD都比较高，BOD也是。还要看你的是什么水源来的了。工业的BOD稍小，生活的稍大。
2.水样悬浮物多，一般BOD也会高，应该适当稀释水样再测试溶解氧。如果干扰还是存在，可考虑改用溶解氧仪测定5天前后的水样溶解氧。
3.PH值也要注意 7.0
4.做BOD5*主要是确定稀释比，可先做高锰酸盐指数或COD，再定稀释比。我个人认为用稀释接种水稀释效果好一些。另外，DO用仪器测，不要用滴定了！
5不知你要不要求对外出具公证性数据，如果要的话，肯定得用国标方法
国标里对仪器实验条件都写得很清楚
我这里有他们的国标号，希望能对你有帮助
溶解氧                溶解氧测定操作方法                     GB/T 11913—1989
亚******氮        水质  亚******的测定    分光光度法         GB/T7493—1978
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